流式細(xì)胞術(shù)平臺(tái)

取全血用CD45-PerCP抗體染色，應(yīng)用BD FACSCanto™ II流式細(xì)胞儀進(jìn)行CD45細(xì)胞表達(dá)分析，可見CD45免疫細(xì)胞分群。

圖1：人外周血免疫細(xì)胞CD45表達(dá)的流式細(xì)胞術(shù)分析

CD45又稱白細(xì)胞共同抗原（Leukocyte Common Antigen, LCA），是一種廣泛存在于白細(xì)胞表面的單鏈跨膜蛋白，CD45包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域：

（1）胞漿C末端：CD45胞質(zhì)區(qū)結(jié)構(gòu)域是高度保守的，在哺乳動(dòng)物中同源結(jié)構(gòu)占95%。該結(jié)構(gòu)域約含700個(gè)氨基酸殘基，由兩個(gè)具有PTPase活性的蛋白絡(luò)氨酸磷酸酯酶結(jié)構(gòu)域組成，D1具有磷酸酶活性，D2通過與D1互作改變空間構(gòu)象而使CD45分子結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定并具備最佳活性。CD45分子通過胞質(zhì)區(qū)的PTPase活性能使底物P56^lck和P59^fyn上絡(luò)氨酸脫磷酸而激活，在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。

（2）跨膜區(qū)域：含有22個(gè)氨基酸殘基。

（3）胞膜外糖基化氨基末端區(qū)域：胞膜外區(qū)含有約400個(gè)氨基酸，有11-15個(gè)N-糖基化位點(diǎn)及多個(gè)O-糖基化位點(diǎn)，整個(gè)結(jié)構(gòu)域呈現(xiàn)高糖基化狀態(tài)。轉(zhuǎn)錄過程中對(duì)編碼胞外結(jié)構(gòu)域4、5、6（或A、B、C）三個(gè)外顯子的選擇性剪切產(chǎn)生了多個(gè)異構(gòu)體，CD45異構(gòu)體選擇性地表達(dá)在各種白細(xì)胞不同分化階段，同時(shí)隨著細(xì)胞的分化和激活，CD45異構(gòu)體之間可發(fā)生轉(zhuǎn)換。所有的CD45異構(gòu)體可歸類為4種特異性單抗即CD45RA、CD45RB、CD45RC和CD45RO。CD45RA識(shí)別外顯子4的表位，存在于初始T細(xì)胞表面；CD45RB識(shí)別外顯子5的表位，表達(dá)于B細(xì)胞、初始T細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，CD45RB在T細(xì)胞受體和B細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起重要作用，當(dāng)初始T細(xì)胞分化為記憶T細(xì)胞時(shí)，CD45RB表達(dá)下調(diào)；CD45RO不包含4、5、6三個(gè)外顯子，主要存在于激活或記憶T細(xì)胞表面。

圖2：CD45胞膜外區(qū)可變剪切