免疫比濁平臺(tái)
免疫比濁法（Turbidimetric inhibition immunoassay）也被稱作免疫濁度法，是一種將現(xiàn)代光學(xué)測(cè)量?jī)x器、自動(dòng)分析檢測(cè)系統(tǒng)與抗原抗體免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù)。當(dāng)溶液中的抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合形成免疫復(fù)合物，免疫復(fù)合物會(huì)從液相析出使溶液產(chǎn)生一定的濁度，當(dāng)有光線通過(guò)溶液時(shí)，光線在碰到抗原抗體復(fù)合物后就會(huì)產(chǎn)生折射或吸收，測(cè)定這種折射和吸收后的透射光或散射光，即可得到溶液的濁度，進(jìn)而計(jì)算出樣品的含量。
利用免疫比濁平臺(tái)能夠準(zhǔn)確的對(duì)液體介質(zhì)中的微量抗原、抗體、藥物及其他小分子半抗原物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，在臨床上具有廣泛的應(yīng)用。
免疫比濁原理
當(dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適(一般規(guī)定抗體過(guò)量)時(shí)，形成小分子可溶性免疫復(fù)合物，形成的可溶性免疫復(fù)合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度，當(dāng)反應(yīng)液中保持抗體過(guò)剩時(shí)，形成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增加，反應(yīng)液濁度與抗原含量呈正相關(guān)。當(dāng)光線通過(guò)反應(yīng)液時(shí)遇到這些微粒后會(huì)形成折射或吸收，對(duì)透射光或折射光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定即可得到反應(yīng)液濁度。用一系列已知濃度的抗原標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行試驗(yàn)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出標(biāo)本中抗原含量。
圖1：免疫比濁原理
抗原抗體復(fù)合物形成與光濁度的關(guān)系
抗原抗體的比例是濁度形成的關(guān)鍵因素，反應(yīng)物抗原與抗體的比例決定了復(fù)合物顆粒的大小?？乖?抗體復(fù)合物形成可以分為三步：
- 1. 初步形成抗原-抗體二元復(fù)合物
- 2. 復(fù)合物交聯(lián)成大的網(wǎng)絡(luò)狀復(fù)合物；
- 3. 復(fù)合物產(chǎn)生絮狀沉淀。
抗原抗體在等價(jià)時(shí)，抗原和抗體全部結(jié)合，即無(wú)過(guò)剩的抗原，也無(wú)過(guò)剩的抗體，這時(shí)復(fù)合物的形成和解離相等；當(dāng)反應(yīng)液中抗體過(guò)量時(shí)，復(fù)合物隨著抗原量遞增至而增加，至抗原抗體量相當(dāng)時(shí)反應(yīng)液濁度達(dá)到最高點(diǎn)；當(dāng)抗原過(guò)量時(shí)，復(fù)合物小，光散射少。所以在比濁法中必須在反應(yīng)液中抗體過(guò)量時(shí)進(jìn)行。
發(fā)展歷程
在1938年，Libby將光濁度測(cè)定原理用到了抗原抗體反應(yīng)上，并對(duì)這種新的檢測(cè)方法進(jìn)行了摸索。但當(dāng)時(shí)由于蛋白質(zhì)純化技術(shù)不完善，特異性血清制備有困難，因此阻礙了技術(shù)的發(fā)展。他在這方面的研究雖然沒(méi)有得到滿意的結(jié)果，但卻成功地吸引了許多學(xué)者的目光。
20世紀(jì)50年代末60年代初，Schultze和Schwick提出若干種血漿蛋白與其特異抗體結(jié)合后形成的抗原抗體復(fù)合物可以引起液體濁度改變，并可以用比濁計(jì)來(lái)進(jìn)行測(cè)定，成功地提出了“透射比濁法”。但遺憾的是，這種方法當(dāng)時(shí)因其靈敏度低而沒(méi)有被廣泛接受。
1967年，Ritchie提出了用激光散射法來(lái)測(cè)定抗原抗體復(fù)合物，這中方式被稱之為“散射比濁法”。這使得常規(guī)的凝膠內(nèi)擴(kuò)散沉淀法由數(shù)十小時(shí)縮短為數(shù)十分鐘。從此，免疫比濁技術(shù)開(kāi)始了快速發(fā)展。同時(shí)，飛速發(fā)展的單克隆抗體技術(shù)也對(duì)免疫比濁法起到了極大的促進(jìn)作用。20世紀(jì)70年代初，出現(xiàn)了利用濁度進(jìn)行的自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)，但由于用激光作為光源，且固定波長(zhǎng)，所以靈敏度較低，而且時(shí)間一般要2～3h。到20世紀(jì)70年代末，出現(xiàn)了速率比濁計(jì)，使抗原抗體結(jié)合的反應(yīng)在幾十秒內(nèi)出結(jié)果，這帶來(lái)了免疫化學(xué)測(cè)定的革命性的發(fā)展。
如今，自動(dòng)化免疫分析系統(tǒng)更加飛速發(fā)展，已經(jīng)成為了免疫診斷技術(shù)中最重要的檢測(cè)手段之一。它使得臨床化學(xué)檢驗(yàn)方法的靈敏度更高、特異性更強(qiáng)，自動(dòng)化程度更高。尤其為疾病的診斷、療效觀察及病因探討提供了更直接和客觀的資料。
免疫比濁分類
按測(cè)定方法分類
按照測(cè)定方法的不同可以將免疫比濁分為終點(diǎn)濁度測(cè)定法和速率濁度測(cè)定法，前者是測(cè)定抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)完成后測(cè)定其復(fù)合物的量，后者是在抗原與抗體反應(yīng)的最高峰（約1分鐘）測(cè)定其復(fù)合物形成的量。
按照檢測(cè)儀器分類
當(dāng)光線遇到免疫復(fù)合物時(shí)會(huì)發(fā)生透射或散射，對(duì)透射光或散射光進(jìn)行檢測(cè)均可測(cè)得反應(yīng)液濁度，因此可以按照檢測(cè)儀器將免疫比濁分為免疫透射比濁法和免疫散射比濁法。
免疫透射比濁法：入射光線與光度接收器在同一水平面上的檢測(cè)方法，目前臨床應(yīng)用較多的是免疫透射比濁技術(shù)。
免疫散射比濁法：入射光線與光度接收器不在同一水平面上的檢測(cè)方法（光度接收器與水平面形成0°到90°的夾角）
按照有無(wú)增強(qiáng)作用分類
按照有無(wú)增強(qiáng)作用可以將比濁分為普通免疫比濁和膠乳增強(qiáng)免疫比濁。
普通免疫比濁：值抗原抗體直接反應(yīng)產(chǎn)生濁度進(jìn)行分析的方法。
膠乳增強(qiáng)免疫比濁：即指羧基化聚苯乙烯微球通過(guò)EDC偶聯(lián)上抗體，再于抗原反應(yīng)，起到信號(hào)放大作用的方法。
免疫比濁試劑盒
免疫比濁平臺(tái)由檢測(cè)儀器及免疫比濁試劑盒兩部分組成，下面就免疫比濁試劑盒做一介紹。免疫比濁試劑盒一般包含3部分：
檢測(cè)試劑：又分為試劑R1和試劑R2，試劑R1主要是緩沖鹽體系，提供抗原抗體比較適宜的反應(yīng)條件；試劑R2主要成分就是抗體（膠乳比濁試劑盒R2試劑為偶聯(lián)上抗體的羧基化聚苯乙烯膠乳微球），R2試劑制備是免疫比濁試劑盒的核心技術(shù)。
校準(zhǔn)品：為檢測(cè)試劑在生化儀上制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的定制和抗原樣品。
質(zhì)控品：為檢測(cè)試劑在生化儀上的重復(fù)性，穩(wěn)定性的定值抗原樣品。
免疫比濁試劑盒評(píng)價(jià)
免疫比濁試劑盒評(píng)價(jià)主要包括以下內(nèi)容：
精密度：包括批內(nèi)精密度和批間精密度；
線性范圍：評(píng)價(jià)試劑在一定范圍內(nèi)的線性程度；
準(zhǔn)確度：評(píng)價(jià)試劑與其他廠家是否具有可比性；
抗干擾能力：評(píng)價(jià)試劑在一定干擾物質(zhì)存在的條件下，測(cè)試值與理論值的差距是否在合理范圍內(nèi)；
穩(wěn)定性：包括上機(jī)開(kāi)瓶穩(wěn)定性，實(shí)時(shí)儲(chǔ)存穩(wěn)定性及運(yùn)輸穩(wěn)定性；
臨床應(yīng)用
免疫功能監(jiān)測(cè)：免疫球蛋白A、免疫球蛋白C、免疫球蛋白M、免疫球蛋白輕鏈k，免疫球蛋白輕鏈λ、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4等。
心血管疾病檢測(cè)：載脂蛋白A1、載脂蛋白B、脂蛋白α等
炎癥狀況檢測(cè)：C-反應(yīng)蛋白、血清淀粉樣蛋白A、降鈣素原、銅藍(lán)蛋白等。
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎檢測(cè)：類風(fēng)濕因子、C-反應(yīng)蛋白、抗鏈球菌溶血素O等。
腎臟功能監(jiān)測(cè)：尿微量白蛋白、α1微球蛋白、β2微球、轉(zhuǎn)鐵蛋白、免疫球蛋白G等。
營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)監(jiān)測(cè)：白蛋白、前白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。
新生兒體檢：C反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白A、前白蛋白、免疫球蛋白G等
凝血及出血性疾病的檢測(cè)：抗凝血酶Ⅲ、觸珠蛋白等
藥物濃度檢測(cè)：丁胺卡那霉素、卡馬西平、慶大霉素、苯巴比妥、苯妥因奎尼丁、妥布素等。
相關(guān)產(chǎn)品
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