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體外診斷試劑性能指標--穩(wěn)定性

穩(wěn)定性是體外診斷試劑隨時間推移保持特性一致性的能力,是試劑必須具有的基本屬性,是確保試劑使用過程中有效性的重要指標,也是生產(chǎn)商的職責(zé)。

在2014年9月5日,國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布了《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告(2014年第44號)》,公告的附件3中規(guī)定“穩(wěn)定性研究資料包括至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料,并應(yīng)當充分考慮產(chǎn)品在儲存、運輸和使用過程中的不利條件,進行相應(yīng)的穩(wěn)定性研究。應(yīng)當詳細說明穩(wěn)定性研究方法的確定依據(jù)及具體試驗方法、過程”。上述規(guī)定是體外診斷試劑產(chǎn)品注冊資料中穩(wěn)定性研究部分的審評依據(jù),規(guī)定了穩(wěn)定性研究的要求、批次和條件等,但對具體的研究方法及內(nèi)容并未進行詳細規(guī)定,現(xiàn)參考《生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》和美國臨床和實驗室標準化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)發(fā)布的指南性文件EP25-A,介紹體外診斷試劑產(chǎn)品穩(wěn)定性研究的基本內(nèi)容及注意事項。

1.國內(nèi)體外診斷試劑穩(wěn)定性研究現(xiàn)狀

目前大部分企業(yè)在研發(fā)過程中已開始重視穩(wěn)定性研究內(nèi)容,但有些企業(yè)在產(chǎn)品注冊過程中提交的穩(wěn)定性研究資料中仍然存在許多問題。如:

①企業(yè)將研究重點放在效期穩(wěn)定性和加速穩(wěn)定性研究上,忽視了產(chǎn)品開封穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性和試劑中所含質(zhì)控品、校準品穩(wěn)定性的研究

②企業(yè)對產(chǎn)品穩(wěn)定性考察項目不同,有的企業(yè)只考察試劑最后的化學(xué)、生物性能是否符合要求,而有的企業(yè)則增加了對試劑物理性能的考察,如外觀、裝量、移行速度等;

③效期穩(wěn)定性研究中,有的企業(yè)是研究在規(guī)定儲存條件下保存至有效期末的產(chǎn)品,有的企業(yè)是研究在規(guī)定儲存條件下保存至有效期后1、2個月乃至半年的產(chǎn)品;

④在對產(chǎn)品運輸穩(wěn)定性項目的研究中,相同品種在不同生產(chǎn)企業(yè)的研究項目中模擬運輸條件差別很大;

⑤產(chǎn)品含校準品、質(zhì)控品的穩(wěn)定性研究中,有的企業(yè)只考察了校準品、質(zhì)控品的“準確度”項目,而忽視了“均一性”等項目的考察;

⑥在制定產(chǎn)品有效期時,大部分企業(yè)依據(jù)的是產(chǎn)品效期穩(wěn)定性研究資料,少部分企業(yè)依據(jù)的是產(chǎn)品加速穩(wěn)定性研究資料;

⑦僅進行了一批產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究工作,未按法規(guī)要求進行三批產(chǎn)品的穩(wěn)定性實驗;

⑧部分企業(yè)因?qū)嶋H生產(chǎn)樣品在注冊申報時留樣時限較短,故采用前期實驗室研發(fā)過程中的樣品代替實際生產(chǎn)樣品來考察產(chǎn)品穩(wěn)定性;

⑨穩(wěn)定性研究實驗結(jié)果的描述過于籠統(tǒng),如使用“CV值小于10%”“符合產(chǎn)品技術(shù)要求規(guī)定”等語句表示,應(yīng)根據(jù)實測結(jié)果提供具體檢測數(shù)據(jù);

⑩只提供穩(wěn)定性考察期末的研究數(shù)據(jù),未提供穩(wěn)定性考察過程中不同時間段的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù);

?不同企業(yè)對同一類產(chǎn)品的有效期要求不一致,如糖化血紅蛋白檢測類產(chǎn)品的有效期6~36個月不等。

2.穩(wěn)定性研究的方案

2.1穩(wěn)定性研究目的

穩(wěn)定性作為體外診斷試劑保持產(chǎn)品安全有效的重要指標,對產(chǎn)品的生產(chǎn)、運輸、保存和使用等環(huán)節(jié)具有重要的指導(dǎo)意義。體外診斷試劑本身就是生物試劑,一些活性基團會有不同的化學(xué)不穩(wěn)定性趨向,容易發(fā)生水解、酶解和氧化等反應(yīng),從而影響到試劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性。如含有多肽類的凍干粉試劑,其儲存環(huán)境中的含水量和含氧量對試劑穩(wěn)定性的影響非常大。

因此,穩(wěn)定性研究的目的包括:①確定產(chǎn)品的運輸、儲存和開封后的保存條件;②確定產(chǎn)品的保存期限和開封后保存期限;③產(chǎn)品儲存條件和保存期限等發(fā)生變更時,驗證變更后的產(chǎn)品穩(wěn)定性;④根據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果,評價和調(diào)整產(chǎn)品組方、工藝、包裝材料等。如某體外診斷試劑產(chǎn)品穩(wěn)定性研究目的:為考察試劑盒的穩(wěn)定性,對三批產(chǎn)品進行儲存溫度2~8?C的穩(wěn)定性試驗、37?C的加速穩(wěn)定性試驗、2~8?C的開瓶穩(wěn)定性試驗、模擬運輸穩(wěn)定性試驗等,根據(jù)試驗結(jié)果確定產(chǎn)品的有效期、開封有效期并確定試劑盒的運輸條件。

2.2穩(wěn)定性研究的材料

穩(wěn)定性研究的材料包括試驗儀器、試驗試劑(3批)、校準品、質(zhì)控品等。穩(wěn)定性研究中的試驗儀器應(yīng)為產(chǎn)品的適用機型。除試驗儀器外,穩(wěn)定性研究中還會用到恒溫箱、冷藏柜、恒濕箱等儀器,上述儀器應(yīng)定期檢查,防止因為儀器的故障導(dǎo)致穩(wěn)定性試驗失敗。試驗試劑應(yīng)為實際生產(chǎn)條件下的三批試劑,并分別說明三個批次的批號,三個批次的生產(chǎn)工藝與質(zhì)量要求均應(yīng)保持一致。試劑的包裝材料應(yīng)與實際儲存采用的包裝材料一致。質(zhì)控品、校準品等應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求中的相關(guān)要求。

2.3穩(wěn)定性研究的項目

穩(wěn)定性研究的項目應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品組成和方法學(xué)原理來選擇評價產(chǎn)品質(zhì)量和有效性的項目。一般選擇產(chǎn)品技術(shù)要求中規(guī)定的項目,如最低檢測限、準確性、重復(fù)性、線性范圍、特異性、陰/陽性參考品符合率等。如果穩(wěn)定性研究結(jié)果出現(xiàn)不符合研究方案中確定的評價指標的情況時,應(yīng)進一步分析原因。導(dǎo)致產(chǎn)品不穩(wěn)定的原因可能是組分不穩(wěn)定、包裝材料破損或者儲存、運輸條件變化等因素,企業(yè)應(yīng)在確定原因后采取改進措施,并在改進之后對產(chǎn)品重新進行穩(wěn)定性研究。

3.穩(wěn)定性研究方法

3.1 效期穩(wěn)定性評價

效期穩(wěn)定性評價即實時穩(wěn)定性評價,是將體外診斷試劑置于制造商規(guī)定的條件下建立或驗證試劑保存期的試驗。根據(jù)生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則要求,生物制品效期穩(wěn)定性研究時間設(shè)定一般原則是“第一年內(nèi)每隔三個月檢測一次,第二年內(nèi)每隔六個月檢測一次,第三年開始可以每年檢測一次。如果有效期為一年或一年以內(nèi),則長期穩(wěn)定性應(yīng)為前三個月每月檢測一次,以后每三個月一次”。體外診斷試劑可根據(jù)產(chǎn)品具體情況來確定考察時間,對于產(chǎn)品性能可能會發(fā)生變化的時段應(yīng)進行密集檢測。體外診斷試劑產(chǎn)品提交注冊申請前的注冊檢驗和臨床試驗時間可以一并計入產(chǎn)品穩(wěn)定性研究時限中。如某體外診斷試劑(效期穩(wěn)定性定為1年)穩(wěn)定性研究方法為將三個批號的試劑盒放入2~8?C的冷藏柜中,自放置之日起分別在0、1、2、3、6、9、12、13個月時各取原裝未開封試劑,參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測方法對產(chǎn)品進行檢測,各指標均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標要求。

3.2 加速穩(wěn)定性評價

加速穩(wěn)定性評價是通過設(shè)定溫度、濕度、光或振動等極端條件考察體外診斷試劑的產(chǎn)品各項物理、化學(xué)、生物性能,從而推斷體外診斷試劑有效期的研究。由于大部分診斷試劑中主要組分為蛋白類物質(zhì),在進行加速穩(wěn)定性研究中,升高溫度來考察試劑穩(wěn)定性成為常用的方式,通常是在長期穩(wěn)定性研究溫度條件下至少升高15?C。如某試劑(效期穩(wěn)定性定為1年。

加速穩(wěn)定性研究方法為:將三個批號的試劑盒放入37?C恒溫培養(yǎng)箱中,分別于第0、3、6、10天各取原裝未開封試劑,參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測方法對產(chǎn)品進行檢測,各指標均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標要求。目前,有企業(yè)認為,試劑在37?C放置3d相當于4?C放置半年,37?C放置7d相當于4?C放置1年,還有企業(yè)認為半年的加速穩(wěn)定性研究后可以將產(chǎn)品效期穩(wěn)定性定為2年,這些說法是缺乏科學(xué)依據(jù)的。由于體外診斷試劑結(jié)構(gòu)組成比較復(fù)雜,可能同時存在多種降解途徑,不同條件下的降解、聚合、變性、失活,以及與包裝材料之間的相互作用等各不相同,所以一般情況下,加速穩(wěn)定性研究只能用于產(chǎn)品一般性能研究,不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期。

3.3 運輸穩(wěn)定性評價

運輸穩(wěn)定性評價是基于對試劑實際運輸條件的了解(如運輸時間、預(yù)計溫度和濕度)來模擬運輸條件存放產(chǎn)品從而評價產(chǎn)品的穩(wěn)定性。運輸穩(wěn)定性的研究應(yīng)遵守目前監(jiān)管部門對體外診斷試劑冷鏈運輸管理的有關(guān)法規(guī)要求。在運輸穩(wěn)定性考察中主要考慮的條件有:極端溫度條件,溫度循環(huán)條件,沖擊與振蕩,壓力與濕度等。生產(chǎn)企業(yè)可以通過實地追蹤記錄體外診斷試劑產(chǎn)品的物流運輸情況為模擬運輸模式的確定提供參考。如某檢測試劑盒模擬運輸穩(wěn)定性研究方法為,將三批試劑盒放在高溫37?C時存放3d,再從1.5m高度,讓試劑盒自由落體跌落,反復(fù)3次,進行震蕩跌落試驗,觀察試劑盒外包裝、內(nèi)包裝等有無破損后,參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測方法對產(chǎn)品進行檢測,各指標均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標要求。

3.4 開封穩(wěn)定性

即開瓶穩(wěn)定性,是考察試劑在正常使用條件下,外界因素對試劑性能指標的影響。由于試劑、試紙條等在開封后會與空氣接觸產(chǎn)生氧化、降解等反應(yīng),部分試劑在開瓶上機后的外界條件與原儲存條件差別很大,以及部分試劑還會存在使用者二次配制等情況,所以在制定開封穩(wěn)定性研究方法時應(yīng)充分考慮到各種環(huán)境因素。如果試劑中含有堿性物質(zhì)時,開瓶后長期放在生化分析儀中,空氣中的二氧化碳會與試劑中的堿性成分反應(yīng),從而影響檢測結(jié)果的準確度。因此對上述試劑,每次使用之后應(yīng)蓋緊瓶蓋,避免接觸空氣。生化分析儀的試劑盤的溫度范圍一般為5~15?C,因此,當試劑中含有對溫度敏感的組分時,試劑使用后應(yīng)立刻放回2~8?C冰箱中儲存,并盡快使用。通常試劑開瓶7d后,檢測前應(yīng)重新校準,以提高檢測結(jié)果的準確度。如某試劑盒開封穩(wěn)定性研方法為:開啟三個批號的試劑盒放入2~8?C的冷藏柜中保存30d,自放置之日起分別在0、15、30、45d時取樣,每次取樣后擰緊瓶蓋并放回2~8?C保存,參考產(chǎn)品技術(shù)要求中的線性、準確度、精密度、最低檢測限等檢測方法對產(chǎn)品進行檢測,各指標均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標要求。

4.穩(wěn)定性研究結(jié)果分析

穩(wěn)定性研究是體外診斷試劑產(chǎn)品質(zhì)量評價的重要部分,穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)符合穩(wěn)定性研究方案中設(shè)定的結(jié)果可接受范圍。企業(yè)應(yīng)對不同批次的產(chǎn)品的研究結(jié)果進行一致性分析,以驗證產(chǎn)品是否存在批間差異。同時應(yīng)在考察期末對同一批次產(chǎn)品在不同時期的檢測結(jié)果進行變異分析,考察其性能隨時間下降的趨勢,最后根據(jù)研究方案中設(shè)定的可接受結(jié)果范圍確定產(chǎn)品的儲存條件和有效期。

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