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心肌肌鈣蛋白I(cTnI)的測(cè)定方法

心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是心肌損傷的敏感性和特異性指標(biāo),與其他檢測(cè)指標(biāo)相比,cTnI在血液中出現(xiàn)時(shí)間早、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。cTnI作為一項(xiàng)理想的心肌損傷標(biāo)志物,對(duì)急性心肌梗死(AMI)、不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)等疾病的預(yù)測(cè)診斷、病情檢測(cè)、療效觀察及預(yù)后評(píng)估都具有較高的臨床價(jià)值。測(cè)定血清cTnI水平的方法有多種,本文主要介紹當(dāng)下幾個(gè)比較重要的測(cè)定技術(shù),并簡(jiǎn)要分析了其特點(diǎn)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定cTnI

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是一項(xiàng)被廣泛用于臨床的酶標(biāo)固相免疫測(cè)定技術(shù)。ELISA檢測(cè)cTnI主要方法是通過將待測(cè)血清與辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的特異性抗體混合并孵育,再向包被了cTnI的微孔板中加入已經(jīng)孵育好的混合液,由于微孔板之前包被的cTnI與待測(cè)樣品中的cTnI共同競(jìng)爭(zhēng)單抗,使得微孔板上的HRP被間接固定住,從而可通過測(cè)定被間接固定在微孔板中的HRP催化活性,與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照計(jì)算得到待測(cè)血清中cTnI的濃度。目前,ELISA方法檢測(cè)cTnI已經(jīng)成熟化,適合于批量檢測(cè)。但由于血清中cTnI的含量偏低,臨床檢測(cè)需快速,而ELISA步驟較為繁瑣,測(cè)定所需時(shí)間偏長(zhǎng),且靈敏度相對(duì)偏低,因而此法在cTnI檢測(cè)中的應(yīng)用受到一定限制。

膠體金法測(cè)定cTnI

膠體金免疫層析技術(shù)主要通過雙抗體夾心法原理定性檢測(cè)人血清/血漿中的cTnI。在試劑卡中的纖維膜上質(zhì)控線(C線)包被有羊抗鼠IgG,檢測(cè)線(T線)包被有抗cTnI單克隆抗體-2,另一端包被有抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金復(fù)合物。檢測(cè)時(shí),待測(cè)血清/血漿樣品首先與抗cTnI單克隆抗-1-膠體金混合,并沿纖維膜向上層析依次通過T線、C線(C線必須顯色,否則結(jié)果無效)。如果血清/血漿中有cTnI存在,cTnI首先和抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金結(jié)合,形成“cTnI-抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金復(fù)合物”,在層析至T線時(shí),會(huì)被預(yù)先包被在T線的另一抗cTnI單克隆抗體-2捕獲。結(jié)果顯示在T線和C線處均出現(xiàn)一條紅色線條,為陽(yáng)性,表示樣品中有超出檢出靈敏度的cTnI存在,提示病人發(fā)生了心肌梗塞;若在T線處未形成線條,為陰性,表示樣品中無cTnI存在或cTnI濃度低于檢出靈敏度。膠體金法樣本用量少,簡(jiǎn)便快捷,可快速獲得診斷結(jié)果,其局限性在于結(jié)果只能初步定性分析,不能進(jìn)一步定量分析。

化學(xué)發(fā)光法測(cè)定cTnI

化學(xué)發(fā)光法測(cè)定cTnI主要分為兩類。一類是較為普遍應(yīng)用的測(cè)定系統(tǒng)采用直接化學(xué)發(fā)光法,通過小分子化學(xué)發(fā)光劑吖啶酯直接標(biāo)記抗原或抗體,反應(yīng)洗滌后,在堿性條件下檢測(cè)其發(fā)光強(qiáng)度,從而檢測(cè)cTnI。另一類測(cè)定cTnI的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)多采用酶促化學(xué)發(fā)光雙抗體一步夾心酶免疫分析法,以ALP作為標(biāo)記物,用單克隆抗cTnI IgG抗體包被的磁性微粒為固相載體,檢測(cè)時(shí)樣品中的cTnI與包被在固相載體上的抗體及ALP標(biāo)記的抗體形成夾心復(fù)合物,加入發(fā)光基質(zhì)底物,測(cè)定其發(fā)光強(qiáng)度,通過多點(diǎn)標(biāo)定曲線計(jì)算cTnI濃度。化學(xué)發(fā)光法不僅安全、靈敏,而且通用性強(qiáng),但儀器成本相對(duì)ELISA法而言較高。

膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定cTnI

膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定cTnI是通過將cTnI與包被有特異性抗體的致敏膠乳顆粒結(jié)合,使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯(lián),測(cè)定一定波長(zhǎng)下溶液濁度增加的程度與標(biāo)本中cTnI含量關(guān)系。該測(cè)定方法不僅特異性強(qiáng),靈敏度高,重復(fù)性好,線性范圍寬,而且操作簡(jiǎn)便、快速,具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。有研究者比較了3種cTnI試劑在自動(dòng)生化分析儀分析后的性能參數(shù),結(jié)果顯示膠乳增強(qiáng)免疫比濁測(cè)定cTnI具有較高的精密度和靈敏度,與化學(xué)發(fā)光免疫分析具有良好的相關(guān)性。

cTnI作為心肌損傷的一項(xiàng)特異性指標(biāo),已被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、風(fēng)險(xiǎn)分層以及療效觀察等方面。有關(guān)cTnI的檢測(cè)方法也在不斷更新,除以上介紹的四種方法外,還有熒光分析法、質(zhì)譜分析法、生物傳感器法等等。在測(cè)定方法日趨完善的同時(shí),廣大研究者更需致力于cTnI測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化問題。

參考文獻(xiàn)

[1]李玉芹,李會(huì)強(qiáng). 肌鈣蛋白I的檢測(cè)方法和研究進(jìn)展[J]. 哈爾濱醫(yī)藥, 2013, 29(3):231-232.
[2]陳浩全,曾嫚妮. 3種肌鈣蛋白I試劑在自動(dòng)生化儀上的分析性能驗(yàn)證[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 33(20):2541-2543.

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